豬瘟試劑盒使用說明書

（豬瘟試劑盒）

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒（PCR熒光探針法）

英文名稱：Diagnostic Kit for African Swine Fever Virus （PCR Fluorescence Probing）

［預期用途］

本試劑盒主要用于檢測疑似感染豬抗凝血及臨床病料中的非洲豬瘟病毒（ASFV, African Swine Fever

Virus）核酸，適用于非洲豬瘟病毒的檢測就此掀開、輔助診斷和流行病學調(diào)查穩定發展。

【試劑盒組分】

1、試劑盒組成及貯藏條件

【操作步驟】

一、樣品制備

1資源優勢、 血液樣品：采集抗凝血（抗凝劑為EDTA）或血清樣品高效利用，編號備用。

2不斷完善、 組織樣品：采集脾臟進一步提升、肝臟、淋巴結營造一處、扁桃體等病變組織樣品或軟蜱0.1g（黃豆粒大懈母飫撔?。劭萍艏羲橛诮M織勻漿器或研缽中充分勻漿或研磨，再加1mL生理鹽水混勻新模式，4°C條件下8000 rpm/分鐘離心2分鐘實現，取上清液于滅菌離心管中，編號備用組織了。

二服務體系、DNA提取

取反應液A 20μL分別加入到新的1.5mL離心管，加入抗凝而或血清或組織上清液2μL混勻搶抓機遇，室溫（20°C左右）靜置3分鐘分析，加入反應液B 20μL,吹打混勻即可，若為抗凝全血全面闡釋，則需8000rpm/分鐘再離心2分鐘后做為待檢DNA溶液非常激烈。

二、PCR擴增

1引人註目、配液：取出PCR反應液領域、酶混合液，在室溫*融化后好宣講，充分混勻註入新的動力，瞬離，可將酶混合液全部取岀直接加入到PCR反應液中，充分混勻雙重提升，瞬離后按每份20μL分裝使用；或按照每份PCR反應液17μL, 酶混合液3μL的比例取一定的試驗用量事關全面，混合兩種反應液,瞬離后按照每份20μL分裝到專用熒光PCR 反應管中表現明顯更佳，剩余試劑立即凍存；（操作過程要注意避光）

2規模、加樣擴增：分別向上述PCR反應管中加入5μL樣本 DNA或陰性對照或陽性對照，混勻并瞬離, 放入熒光PCR儀上運行以下程序：

　　熒光通道選擇FAM,在40循環(huán)階段每個循壞的55°C時收集熒光信號基石之一。設置擴增體系為25μL,同時要選擇 passive reference 和 quencher 為 none 的模式聯動。

　　(注:若熒光PCR儀(如ABI7500)按說明書中的反應程序設置后因持溫時間短無法運行,可將預擴增和PCR擴增條件變更為95°C： 5秒 55°C：30秒。)

【結果判定】

1的發生、 基線和閾值設定組成部分；基線調(diào)整取6-15個循環(huán)的熒光信號，閾值設定以閾值線剛好超過陰性對照檢測 熒光曲線的高點為原則新的動力。

2的過程中、 質(zhì)量控制：反應結束后，陰性對照的檢測結果應無特定的擴增曲線廣泛關註，Ct值為＞38或無促進進步；陽性對照 的Ct值應≤30.0,且明顯的擴增曲線；否則實驗視為無效。

3迎來新的篇章、 樣品判定：待檢樣品熒光信號有指數(shù)型增加共創美好，且結果顯示Ct值<35.0,報告為陽性；未檢測到Ct 值或Ct值＞38或無明顯擴增曲線薄弱點，則樣品判定為陰性覆蓋範圍。35≤Ct值≤8時，復檢一次積極性，重復結果為陽性者判定為陽性奮勇向前，否則判定為陰性。

【注意事項】

1實施體系、實驗前請仔細閱讀本試劑盒說明書組建，嚴格按照操作步驟執(zhí)行，在操作過程中對時間發揮、試劑體積等精 確控制可以獲得好的結果顯著。

2、 實驗室應嚴格按照有關規(guī)定分區(qū)管理開放以來。各區(qū)間人員占、器材、試劑及空氣流向應有產(chǎn)格要求提供了有力支撐。

3激發創作、 有關耗材確保潔凈、無菌進一步意見，核酸提取完成后盡快進入下一步試驗或冷凍保存增幅最大。

4、預混后的試劑應盡量在短期內(nèi)使用完畢生產能力，戶外使用應在加冰袋的泡沫盒保存最新，每日試驗完畢應及時 冷凍保存。

5處理方法、 對于熒光PCR管要避免徒手或使用過的手套接觸重要作用，檢測過程中使用不帶熒光物質(zhì)一次性乳膠手套。

6習慣、 凍存試劑使用前應于室溫下*融化充足，充分混勻，瞬時離心使液體*沉于管底的積極性。

7綠色化發展、 樣品、陰性對照封蓋后不久前，在通風環(huán)境添加陽性對照并及時封蓋用上了，避免組分間及氣溶膠等假陽性污染提升行動。

8、 擴增反應完畢后的PCR管嚴禁開蓋,應和試驗產(chǎn)生的其它廢棄物一起及時收集,遠離PCR實驗室 進行無害化處理可靠保障。

【規(guī)格】50頭份/盒自然條件。

【貯藏與有效期】-20°C以下避光保存，有效期12個月開展。

僅供獸醫(yī)診斷使用