非洲豬瘟病毒熒光PCR試劑盒（柱膜法）使用說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：病毒DNA提取試劑盒

英文名稱：Extraction Kit for Virus DNA

【預(yù)期用途】

本試劑盒主要用于疑似病毒等病原感染抗凝血拓展、血淸行動力、拭子應用優勢、組織高質量發展、飼料及環(huán)境中的病毒DNA的提取，純化的核酸可適用于各種常規(guī)操作及PCR試驗高效節能。

【試劑盒組分】

I影響力範圍、試劑盒組成及貯藏條件

2創造性、 保存條件及有效期：室溫下保存發展的關鍵，有效期12個月.

3、 需自備材料：無水乙醇、1.5 mL無菌離心管真諦所在、1.5  mL無菌離心管（長臂型）指導、生理鹽水、研缽充分、無菌

1mL, 2OOuL進一步完善、10uL槍頭、記號筆等競爭力。

非洲豬瘟病毒熒光PCR試劑盒【操作步驟】

一調整推進、樣品制備

1、 血液樣品：抗凝血樣品置離心管中敢於挑戰，8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘不斷創新，取上層血漿；非抗凝血樣品置離心 管中提供了遵循，待凝固后參與水平，8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，取上層血清服務效率，置于滅菌離心管中明確相關要求，編號待檢。

2統籌發展、 組織樣品：采集脾臟深化涉外、肝臟、淋巴結(jié)創新科技、扁桃體等病變組織樣品0.1g.組織勻漿器或研缽中充分勻漿或研磨服務延伸，加入1  mL生理鹽水混勻，8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘具有重要意義，取上清于滅菌離心骨中進一步，編號待檢。

3強大的功能、 口腔液：進食前用拭子/口腔液采集袋或自制棉線綁紗布團吸引動物咀嚼實際需求，收集口腔液大于 500uL， 8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘優勢，取上清于滅菌離心管中善謀新篇，編號待檢。

4便利性、 飼料：取適量研磨后的飼料（約0.2g）方法，放入含1  mL生理鹽水或PBS（PH為7.4）緩沖液的2 mL  EP 管屮，振蕩混勻提供有力支撐，8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘切實把製度，取上清于滅菌離心管中,編號待檢.

5保供、 灰塵：用無菌棉簽蘸取適量環(huán)境表面上的灰塵，放入含1 mL生理鹽水或PBS（PH為7.4）緩沖液的2  mL EP管中進行部署，振蕩混勻責任，8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，取上清于滅菌離心管中示範，編號待檢應用前景。

二、DNA的提取

1運行好、取裂解液200uL加入無核酸酶1.5  mL離心曾屮首次，分別加入血漿/血清/組織液等樣品液200uL.  震蕩混勻10秒或顛倒混勻10次，室溫放置5分鐘（如果室內(nèi)溫度較低時.需放置25C水浴溫育）部署安排，再加入200uL無水乙醇方案，顛倒混勻10秒；若樣品渾濁則先12000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘處理了解情況，取上清液，以避免堵塞柱子技術研究；

2重要的、 將液體轉(zhuǎn)入套有收集管的吸附柱中， 12000rpm離心1分鐘：

3姿勢、 棄收集管液體相互融合，向吸附柱中加600uL洗液I  , 12000 rpm離心1分鐘;

4、 棄收集管液體綠色化，向吸附柱中加600uL洗液II不同需求， 12000  rpm離心I分鐘；

5保持穩定、 棄收集管液體總之，12000  rpm離心2分鐘，以*去除殘留洗液支撐作用；

6研學體驗、將吸附柱轉(zhuǎn)入新的無核酸酸1.5mLEP管（長臂型）中，向柱中央滴加50  uL洗脫液最為突出，靜置1分鐘, 12000 rpm離心1分鐘落實落細，EP管中液體即為病毒DNA。

【注意事項】

1高效化、 實驗前諾仔細閱讀本試劑盒說明書製高點項目，嚴格按照操作步驟執(zhí)行.在操作過程中對時間、試劑體積等  粘確控制可以獲得好的結(jié)果範圍和領域。

2, 樣本應(yīng)新鮮采集使用有所增加，或低溫運輸儲存各項要求；

3, 樣本具有潛在感染風險，核酸的提取應(yīng)在核酸提取實驗室的生物安全柜中進行長效機製。

4講實踐、 核酸提取冇關(guān)耗材確保高溫滅菌，提取后核酸盡快進入下一步試驗或冷凍保存待用奮戰不懈。

5, 試劑使用前應(yīng)混合均勻市場開拓，試劑具有一定腐蝕性，使用時請戴手套大大縮短、口罩做好防護要落實好。

6. 低溫下裂解液出現(xiàn)結(jié)晶數(shù)屬正常現(xiàn)象更默契了，可在60°C水浴加熱助溶后使用先進技術。

7、 實驗產(chǎn)生的廢棄物應(yīng)及時收集不合理波動，遠離PCR實驗室進行無害化處理宣講手段。

僅供獸醫(yī)診斷使用

非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒說明書

【獸藥名稱】

通用名稱：非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒

漢語拼音:Feizliouzhuwen Bingdu  Yingguang PCR Hesuan Jianceshijihe

英文名稱：African swine Fever Virus (ASFV) PCR Nucleic Acid Diagnostic  Kit

 商品名稱：無

【主要成分與含量】試劑盒中含有如下組分:

【用法與判定】

1 用法

1.1待檢樣品釆集生產創效、保存及運輸

1.1.1樣品釆集

（1） 活豬樣品 無菌采集抗凝血或血清5mL

（2） 病死豬剖檢樣品或屠宰場剖檢樣品 無菌采集死豬的牌、肺管理、腎優化上下、扁桃體、淋巴結(jié)模樣、肌肉等組織樣品不斷創新。2?8°C低溫運至實驗室用于檢測。

（3） 病豬污染的周邊環(huán)境 采集與病豬相關(guān)場所的糞便提供了遵循、飼料參與水平、污水樣品。2?8°C低溫運至實驗室用于檢測服務效率。

1.1.2樣品保存 采集的樣品在2?8°C保存應(yīng)不超過24小時明確相關要求，-70°C條件下保存，避免反復(fù)凍 融共同努力。

1.1.3樣品運輸泡沫箱加冰袋后密封進行運輸行業內卷。包裝和運輸應(yīng)符合農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《高致病性動 物病原微生物菌（毒）種或者樣品運輸包裝規(guī)范》和交通運輸部門關(guān)于危險品運輸管理的有關(guān)規(guī)定追求卓越。

1.2樣品處理

1.2.1血液樣品處理 抗凝血樣品置于離心管中，8000  r/min離心2分鐘取上層血漿參與能力，編號待 檢合理需求。非抗凝血樣品置于離心管中，待凝固后充分發揮，8000  r/min離心2分鐘取200μL上層血清高質量，編號待檢。

1.2.2組織樣品處理取適量脾臟選擇適用、肝臟管理、淋巴結(jié)、扁桃體業務指導、肌肉等組織改進措施，置于研磨器或研磨管中研磨，再加適量生理鹽水混勻長足發展，制成約10%的組織勻漿今年，8000  r/min離心2分鐘，取200μL上 清于RNase/DNase-free無菌離心管中結構不合理，編號備用良好。

1.2.3環(huán)境樣品處理

1.2.3.1糞便、飼料樣品處理方法取適量的糞便銘記囑托、飼料放入盛有PBS緩沖液的研磨管中研磨混勻，制成約10%的勻漿液.8000  r/min離心2分鐘自動化裝置，取200μL上清于RNase/DNase-free無菌離心 管中示範，編號備用。

1.2.3.2污水樣品處理方法 直接取200μL污水進行核酸提取有很大提升空間。

1.3病毒核酸的提取用磁珠法或柱式法進行DNA核酸提取運行好。

1.4熒光PCR反應(yīng)：

1.4.1從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液、酶混合液可能性更大，室溫融化后部署安排，2000  r/min離心5秒。設(shè)被 檢樣品技術、陽性對照和陰性對照總和為n,則反應(yīng)體系配制如下：

試劑 體系

PCR 反應(yīng)液 17× (n+1) μL

酶混合液        3×  (n+1) μL

1.4.2在新的RNase/DNase-fire 1.5 ml離心管中加入上述試劑推廣開來，充分混勻后瞬時離心。按照20μL/  管分裝量將試劑分裝至熒光PCR反應(yīng)管示範推廣。

1.4.3在上述制備好的熒光PCR反應(yīng)管中分別加入陰性對照堅持好、陽性對照各5μL、處理好的待測核酸各5μL,終體積25μL/管大幅增加，蓋好熒光PCR反應(yīng)管蓋特性，混勻后瞬時離心傳承，轉(zhuǎn)移到熒光PCR儀器 上。

144將PCR反應(yīng)管放置在熒光PCR儀樣品槽中建言直達，在熒光PCR儀上運行以下程序：

熒光通道選擇FAM,在PCR擴增階段每個循環(huán)的55℃時采集熒光信號多種。設(shè)置擴增體系為25μL,  同時要選擇passive  reference和quencher為none的模式。（注：若熒光PCR儀（如AB17500）按說明 書中的反應(yīng)程序設(shè)置后因持溫時間短無法運行充分發揮，可將預(yù)擴增和PCR擴增條件變更為95C： 5秒 55°C： 30  秒）

2結(jié)果判定

2.1試驗有效性判定

陽性對照有典型擴增曲線且Ct值≤30.且陰性對照無Cl值或無擴增曲線發展成就，線形為直線或輕微斜線，無指數(shù)增長期同時。則判試驗結(jié)果有效互動式宣講。否則，此次試驗視為無效模式。

2.2樣品判定

2.2.1陽性：樣本檢測結(jié)果Ct值≤35且有明顯指數(shù)增長期自動化，判定檢出非洲豬瘟病毒核酸。

2.2.2可疑：樣本檢測結(jié)果Ct值在35?38范圍內(nèi)高品質。此時應(yīng)對樣本進行重復(fù)檢測不折不扣，如果重復(fù)實驗 結(jié)果Ct值仍在35?38范圍內(nèi)，有明顯指數(shù)增長期.則判定為陽性資源優勢，否則為陰性高效利用。

2.2.3陰性：樣本檢測結(jié)果Ct值＞38或無Ct值，判定未檢出非洲豬瘟病毒核酸估算。

【注意事項】（1）實驗前請仔細閱讀本試劑盒說明書講理論，嚴格按照操作步驟執(zhí)行，在操作過 程中對時間不要畏懼、試劑體積等精確控制可以獲得好的結(jié)果服務為一體。

（2）  實驗室應(yīng)嚴格按照有關(guān)規(guī)定分區(qū)管理，依照配液區(qū)-模板提取區(qū)-擴增區(qū)-分析區(qū)順序 進行基因檢測逐漸顯現。各區(qū)間人員全會精神、器材、試劑及空氣流向應(yīng)有嚴格要求拓展基地。

（3）  核酸提取有關(guān)耗村確保潔凈法治力量、無DNase/RNase,提取過程盡量低溫、快速分享，完成后進入 下一步實驗或凍保共享。

（4） 對于頂部采光儀器要帶新的一次性PE手套對熒光PCR管封蓋，對于底部采光儀

器要避免徒手或使用過的手套接觸熒光PCR管底方式之一，檢測過程中使用不帶熒光物質(zhì)一次性乳膠手套全面闡釋。

（5） 凍存試劑使用前應(yīng)于室溫下*融化，瞬時離心使液體*沉于管底競爭力所在。避免反復(fù)凍融引人註目， 以免影響試劑性能領域。

（6） 樣品、陽性對照等在使用后及時封蓋好宣講，.避免組分間及氣溶膠等的污染造成假陽性註入新的動力。

（7）  擴增產(chǎn)物禁止開蓋，實驗產(chǎn)生的廢棄物應(yīng)及時收集，遠離PCR實驗室進行無害化處理雙重提升。

【規(guī)格】50頭份/盒

【貯藏與有效期】試劑盒置-20°C以下避光保存，有效期12個月事關全面。

【批準文號】獸藥生字163668871

【生產(chǎn)企業(yè)】鄭州中道生物技術(shù)有限公司

僅供獸醫(yī)診斷使用